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世界银行进程中的主要问题和建议

来源: www38-365365com 作者: bet365电脑版 发布时间:2019-01-27
通过将蛋白质转移至膜,使用抗体检测蛋白质印迹。
对于已知表达的蛋白质,相应的抗体可以用作检测的第一抗体,并且抗体的融合部分可以检测新基因的表达产物。
通常在WB实验中会出现几个问题。迪申生物技术(上海)有限公司长期致力于免疫组化相关产品的制造,并在一定程度上了解WB实验。今天,我们将与您分享WB实验中的各种问题和应用。
一个问题
可能的原因是什么?
电泳条带是不均匀上的笑脸冷盘,中间冷却不好,电泳系统的温度高时,电压的速率降低,并且电泳建议降低。特别地,如果在凝胶或玻璃挡板的底部存在气泡,或者如果聚合没有完全完成,则冰箱或冰浴中的电泳带可能进入血清。我们调整了双方。尾部样品不能很好地溶解。样品完全溶解并混合。减少调节电极和样品条偏离不平衡或包含在采样纹理(垂直长条)的不溶性颗粒的均匀的条带的偏转电极的样本位置的扩散样品条的量为样品不要在样品的两侧放置孔。高膜密封不足以延长关闭时间。选择最合适的抗体稀释剂。一抗的稀释不适合抗体滴定试验。选择最佳抗体稀释剂。一抗的温度高。建议使用4°C将二抗浓度与二抗浓度相结合,以降低二抗浓度。添加二抗对照,无一抗,以及其他程序以确认背景是否是由二抗引起的。
可以选择其他二抗(更具体,仅用于重链)。延迟时间太长。减少二抗的孵育时间。请选择一个膜。硝基纤维素的底部会相比PVDF膜,在此过程中,薄膜的曝光时间过长,曝光时间缩短,曝光时间缩短,充分提高,薄膜,洗涤该抗体和阻断蛋白时间和频率是交叉反应性的,以检测抗体和阻断蛋白的交叉反应性。反应封闭剂。
将Tween-20添加到洗涤溶液中可以减少交叉反应带的数量。靶蛋白多个修饰位点(磷酸化位点,糖基化位点等乙酰化位点)有,这些是用于获得用于确定与修改或站点的信息蛋白质序列的多个频带进行生物信息学分析。改变修饰的蛋白质试剂的大小。目标蛋白质有另一种切除。书目或在可能的样品处理生物信息学分析的蛋白酶抑制剂样品的蛋白质被添加到分解裂解物样品的处理在冰上过高,太高,足以减少样品体积,初级抗体,纯化的不纯抗体,特异性抗体,不太具体,重选较少特异性第二抗体或用于非特异性结合的第二抗体的其他非特异性结合的第二抗体的控制,加入第一抗体,改变其它操作没有。可以选择其他二抗(更具体,仅用于重链)。一抗或二抗的浓度较高,抗体浓度降低。细胞浓度增加,使用以下作为原代细胞或对照带蛋白产生蛋白质变化:(家庭大小)不影响蛋白质丰度和蛋白质变性的强度,以增加二聚体或过程。例如,翻译后裂解,许多蛋白质,Funciones.La变形成分的蛋白质如糖基化,磷酸化等,必须在氨基酸的活化形式的相对负载执行前体蛋白时被切割它将被合成,因为它会导致蛋白质分子量的增加。不同浓度的凝胶中蛋白质条带的浓度可能有偏差。蛋白质条带抗体不能充分培养以增加抗体浓度并延长酶失活的孵育时间并直接混合酶和底物。如果它不发展颜色,酶就会失活。
在有效期内选择活性酶结合物样品的阳性对照,或将目标蛋白质设置得太低以建立阳性对照。如果阳性对照有结果,但样品没有,则样品可能不含有目标蛋白质或目标蛋白质含量。
考虑增加加载的样品量以解决低目标蛋白质含量。原代和组织物种,一抗和二抗,和/或底物和酶系统之间存在错配。
通过建立内标,可以验证第二检测系统的有效性,抗体的寿命期间被选择的第一抗体,在活性抑制液体HRP使用的溶液和容器是抗体用来避免。与叠氮基钠相关的蛋白质。性别可识别对应于交叉蛋白的二抗,并在购买抗体之前确定一抗是否不匹配,应该仔细阅读。选择弱抗体?抗体种类primario.Amention抗体浓度,长期孵化时间蛋白质带,降低酶活性,直接混合酶和底物。如果它不发展颜色,酶就会失活。
在保质期内选择过量洗涤膜并且活性洗涤剂不应太长或太长也不会太长。建议使用0。蛋白质含量目标样品1%的Tween-20在中性洗涤剂中太低而不能增加样品加载抗体活性,抗体的选择寿命减少,工作液体现在可用想转到乐队或过度转移适当的时间设置是否已经转移(蓝色Coomassi)?在红色与你结合长期留置转导蛋白,避免不suficiente.Película染色的,膜的电流阻断在为了减少或降低时阻断剂,开关的量到一个不同的封端剂。曝光时间太短,无法延长曝光时间。用于HRP抑制剂和容器的溶液不受叠氮化钠的影响。背景染成黑色。抗体与封闭剂反应。在使用之前,第二抗体缀合到封闭试剂HRP,二级抗体agregados.La过滤除去聚集体在暗背景上用白色HRP内容,以减少酶缀合的第二抗体的浓度太高了。在薄膜转移过程中存在不均匀的白点。仔细检测气泡的存在,以避免气泡抗体的不均匀分布。
要编辑
吴春晖

责任编辑:bet365电脑版

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